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農(nóng)桿菌侵染擬南芥花序的轉(zhuǎn)化

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來源：未知作者：admin 發(fā)布時(shí)間：2013-07-28 04:24

準(zhǔn)備：
　　1．滅菌試管400毫升細(xì)長(zhǎng)燒杯2瓶，離心瓶4-6個(gè)（250ml）。

　　2．試劑：YEP1200ml（每瓶300ml共4瓶）+Kan1;1000，Rif1:500。

　　1/2MS+2%蔗糖（滅菌115度20分鐘），Silwet在-20℃貯存。

　　步驟：

　　共轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌：于中午12點(diǎn)接菌于有YEP培養(yǎng)液的試管中10ul：10ml接種。28℃，3000rpm搖過夜，約30小時(shí)，次日下午6點(diǎn)將已搖活的菌按（1：400）及750ul菌液轉(zhuǎn)至漢300毫升YEP+K50+Rif中培養(yǎng)28℃，300rpm約14小時(shí)，次日上午8點(diǎn)測(cè)OD值，用YEP+Rif作為空白對(duì)照，當(dāng)菌液達(dá)到OD600為1.5~3.0之內(nèi)時(shí)，可收集菌體于250ml離心瓶（滅菌）,4℃，4000g離心10min。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀釋至OD600約為0.8--1.0左右即，用10%蔗糖作對(duì)照。轉(zhuǎn)化時(shí)將花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)化前一天將需要做轉(zhuǎn)化的野生型擬南芥苗子澆水澆透。

　　注意：

　　1．選取上述配好的溶液2ml，充分打碎管底部的菌體，在將混勻的菌體溶入600ml溶液中，混勻后再加入Silwet(100%)120ul終濃度為0.02%。

　　2．先將澆透水用于轉(zhuǎn)化的苗子的夾全部剪掉，再用寬膠帶把花盆的土封好。

　　3．轉(zhuǎn)化的準(zhǔn)備工作：2個(gè)400細(xì)長(zhǎng)燒杯，寬膠帶，記號(hào)筆，表等。苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com

　　4．轉(zhuǎn)化過程略，視苗的長(zhǎng)勢(shì)弱0.8Pa3`，長(zhǎng)勢(shì)好的0.8Pa5`。

　　5．標(biāo)記好，將轉(zhuǎn)化好的苗平放于盒子內(nèi)，上蓋封口膜封好，避光培養(yǎng)24hrs2天后，將植株立起正常培養(yǎng)，澆水，3天1次。

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