樹莓屬薔薇科懸鉤子屬多年生灌木，為寒溫帶小漿果，有較強的適應性，栽培比較簡單粗放，管理容易。定植第2年即可結果，第3年進入盛果期，此后可豐產、穩產達15～20年。一般品種產量大約在15 000 kg/ h㎡左右。樹莓含有多種維生素，其中維生素C的含量是蘋果的5倍、葡萄的6倍。維生素E含量為水果之首，SOD、氨基丁酸等抗衰老，抗癌防癌物質含量豐富，根莖葉也具有藥用功效。由于樹莓營養價值高，速凍出口銷路好，因此成為一種正在大力開發栽培的新興果樹，被稱為“第三代水果”。國際市場上樹莓漿果主要用于加工，被加工成果汁、果醬、果酒、果凍、口香糖及各種食品的添加劑、添色劑等，國內零星栽培時有用于制汁、制酒，也有用于鮮食的，是一種待開發的天然保健果品和藥品資源。樹莓分紅莓和黑莓2大系列，是當今風靡世界的第3代水果中的佼佼者，由于它的維生素E、SOD、氨基丁酸等抗衰老物質含量都高于現有水果及其他野果，特別是紅莓的抗癌物質鞣化酸含量豐富，歐美稱之為“紅寶石”。試驗主要以美國選育的黑樹莓品種‘三冠王’和紅莓品種‘紅莓38’為材料，對其初代培養、繼代培養、生根培養以及煉苗和移栽等一系列問題進行系統研究，探討適合黑莓‘三冠王’和‘紅莓38’組培的最佳培養基類型、煉苗和移栽方式，為加快實現樹莓優良品種種苗大規模工廠化生產奠定基礎，為試管苗工廠化生產提供技術依據。

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1 供試材料

筆者從河南省新鄉市封丘縣留光鄉青堆村樹莓專業合作社—樹莓種植基地的地栽樹莓品種黑莓‘三冠王(Triplecrown)’和紅莓‘紅莓38號’的母株上，取生長健壯的枝條為外植體。這2個品種適宜在我國華中、華北、西北等地栽培，其材料引自中國林業科學研究所。 999苗木網,www.cqhuayin.com

2 外植體取材

我們于2008年7月16日，在河南省新鄉市封丘縣留光鄉青堆村樹莓種植基地選生長健壯的無病蟲害母株，剪取生長力較強的莖段、莖尖去除大葉，裝入塑料袋帶回室內保濕保存。

3 培養基的配制

整個培養過程中采用MS為基本培養基。在外植體的不同發育階段分別添加不同種類和濃度的植物激素、蔗糖3. 0％、pH值5. 6～5. 8、瓊脂粉4. 0～4. 5 g/ L固化，分裝后在121℃條件下滅菌20 min，放置備用。其中：(1)誘導腋芽生長培養基為MS+ 6- BA 1. 0 mg/ L+ IBA 0. 1 mg/ L；(2)繼代增殖培養基為MS+ 6- BA 1. 5 mg/ L+ IBA 0. 03 mg/ L；(3)生根培養基為1/ 2 MS+ IBA 0. 2 mg/ L+ 活性炭0. 2％。 苗木網,999miaomu.com

4 無菌系的建立

將去除葉片的莖段、莖尖在自來水下沖洗約30 min，除去表面污染物，在超凈工作臺上用刀片去掉莖段上的刺和絨毛，放入大燒杯中，先用75％酒精浸泡15～20 s，再用0. 1％升汞溶液消毒15 min，最后用無菌水漂洗5次，無菌濾紙吸干水分。將消毒好的外植體放入無菌瓶中接種備用。此階段主要解決滅菌、防止污染問題，可以通過各環節嚴格操作和將母株用殺菌劑處理后再取材等措施提高滅菌效果。

5 誘導腋芽生長

將消毒好的樹莓外植體，首先去除兩端切口與消毒液接觸部分少許，然后將其切割成帶有1個腋芽的小段，接種于腋芽誘導培養基MS+ 6- BA 1. 0 mg/ L+ IBA 0. 1 mg/ L上進行培養。培養室溫度(26±2)℃，光照強度1 000～2 000 lx，每天光照12 h。5 d后，腋芽開始萌動生長，經過15 d左右的培養，外植體全部萌動，并膨大、伸長，芽苗生長快的可達1. 5～2. 0 cm，基部產生少量愈傷組織。20～25 d嫩莖達4～5 cm時，切成帶有1～2個芽的莖段，轉接于新鮮的腋芽誘導培養基上繼代培養。10 d后，長出嫩莖，基部產生少量愈傷組織，并開始出現叢生芽，每一個外植體2～7個不等，20 d后，芽苗長4 cm。

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6 繼代培養

將萌發長成苗的腋芽切割下，接種于繼代增殖培養基MS+ 6- BA 1. 5 mg/ L+ IBA 0. 03 mg/ L上，一般30 d 后可長出叢生芽，繼代周期為35～50 d，增殖倍數5～7倍。要獲得試管繁殖的高效率，植物激素配比是重要因素。為了確定較佳的第一作者簡介：郭玉霞（1980－），女，助理研究員；從事果樹與激素配比，我們配置了以MS為基本培養基，另加植物激素的幾種不同激素濃度的培養基。在試驗過程中發現，6- BA/ IBA比值越大越有利于芽分化。結果顯示，試驗所采用的誘導培養基芽分化雖然較少，但分化的芽都為有效芽。最終篩選出此培養基為最佳的繼代增殖培養基。此外還發現，在繼代培養的接種操作時，切去嫩莖的頂芽后，再轉接于新鮮培養基上，對嫩莖增殖有很大的促進作用。樹莓品種不同，在相同激素水平、相同條件下的生長有很大差異。因此在樹莓用于工廠化組培生長中，不需要盲目追求過高的分化系數，而要求最佳成苗數，因此6- BA濃度不宜超過1. 5 mg/ L。利用樹莓組培技術繁殖速度快，苗生長健壯，是樹莓優良品種種苗繁殖的主要途徑。 999苗木網,999miaomu.com

7 誘導生根

繼代獲得較多的叢生芽后，將長約4～5 cm的芽苗挑出接種于培養基1/ 2 MS+ IBA 0. 2 mg/ L+ 活性炭0. 02％上，進行誘導生根培養。培養條件同前。此期選擇整齊一致的無根苗進行生根培養，這對以后成批形成規范化和標準化生產的商品成株至關重要。接種5 d左右，黑莓品種‘三冠王’就可以出現3～4條健壯白根，而‘紅莓38’則需10 d左右，芽苗迅速長高具有4～6片葉，即可移栽。在生根培養基中加入0. 2 g/ L活性炭對樹莓某些品種嫩莖生根有良好促進作用。

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8 煉苗移栽

在組織培養的過程中，試管苗移栽的成功與否也是一個關鍵環節，因為試管苗在試管中無論生長多好，移栽若不成功則導致前功盡棄。在試驗中，當試管苗具有4～6片葉、5～6條根時即可移栽。移栽前要對試管苗進行通風煉苗，先將生根試管苗拿出培養室，去掉封口膜，使嫩苗逐漸與外界接觸，提高適應能力，常溫下煉苗3 d后，接著向瓶中加入少量溫水，以軟化培養基。移栽時用鑷子輕輕取出試管苗，將根部培養基沖洗干凈，移栽到已消毒的純砂∶草炭= 1∶1的混合基質中。在處理基質時，用代森錳鋅1 000倍液噴霧，充分拌勻后用水淋透，在移栽后的10 d內要注意適當遮陰保濕，然后打開遮陰物，在這之間要及時噴水以保證基質潮濕。試驗結果表明：植株移栽成活率為90. 0％以上。