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植物組織培養(yǎng)基的配制

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來源：作者：發(fā)布時(shí)間：2013-07-27 11:28

母液的配制和保存

    基本培養(yǎng)基母液

    在植物組織培養(yǎng)過程中，配制培養(yǎng)基是日常必備的工作。為減少工作量，經(jīng)常使用的培養(yǎng)基，可先將各種藥品配成濃縮一定倍數(shù)的母液，放入冰箱內(nèi)保存，用時(shí)再按比例稀釋，這樣比較方便，且精確度高。母液要根據(jù)藥劑的化學(xué)性質(zhì)分別配制，一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物質(zhì)等母液。

    在配制大量元素母液時(shí)，要防止在混合各種鹽類時(shí)產(chǎn)生沉淀，為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合。在混合時(shí)要注意加入的先后次序，把Ca2+、Mn2+、Ba2+、SO42-、PO43-錯(cuò)開，以免KH2PO4和MgSO4與CaCl2等發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，相互結(jié)合生成CaSO4、BaSO4、Ca3(PO4)2沉淀。另外在混合各種無機(jī)鹽時(shí)，其稀釋度要大，慢慢混合，同時(shí)邊混合邊攪拌。在配制微量元素母液時(shí)也要注意藥品的添加順序，以免產(chǎn)生沉淀。

    鐵鹽容易發(fā)生沉淀，需要單獨(dú)配制。一般用FeSO4·7H2O和Na2-EDTA配成鐵鹽螯合劑比較穩(wěn)定，不易沉淀，鐵鹽放在棕色瓶中保存比較穩(wěn)定。

    母液要用蒸餾水配制，藥品應(yīng)選用純度較高的化學(xué)純CP或分析純AR，以免有雜質(zhì)對(duì)培養(yǎng)物造成不利影響。藥品的稱量及定容都要準(zhǔn)確，在稱量時(shí)不同的化學(xué)藥品需使用不同的藥勺，避免藥品的交叉污染和混雜，每稱好一種藥劑應(yīng)立即作一記號(hào)，以免重復(fù)或遺漏。各種藥品先以少量水讓其充分溶解，然后依次混合。

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    配制好的母液應(yīng)分別貼上標(biāo)簽，注明母液種類、倍數(shù)、配制時(shí)間，并在記錄本上詳細(xì)記載配制及稱取量，以便工作的準(zhǔn)確及日后檢查。母液最好在2-4℃的冰箱中保存，特別是有機(jī)物質(zhì)要求更嚴(yán)，儲(chǔ)存時(shí)間不宜過長(zhǎng)，如發(fā)現(xiàn)母液有霉菌污染或沉淀變質(zhì)時(shí)，應(yīng)重新配制。

    多數(shù)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑不溶于水或難溶于水，IAA、NAA、IBA、2，4-D等生長(zhǎng)素類和GA3，可先用少量0.1molNaOH或95%酒精溶解，然后再用蒸餾水定容到所需要的體積。KT、6-BA等細(xì)胞分裂素類則可用少量1mol/LHCl加熱溶解，然后加水定容。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液可以在2-4℃的冰箱中保存。配制好的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液，也應(yīng)在瓶上貼上標(biāo)簽，注明名稱、濃度、配制日期，以便配制培養(yǎng)基基時(shí)計(jì)算，準(zhǔn)確量取。

    培養(yǎng)基配制

    將配制好的各種母液按順序排列，并逐一檢查是否有沉淀或變色，避免使用已失效的母液。先取適量的蒸餾水防入容器內(nèi)，然后依次用移液管按培養(yǎng)基配方要求量吸取預(yù)先配制好的各種母液及生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等，并混合在一起。再將瓊脂粉和糖加入其中，溶解混勻后加蒸餾水定容至所需體積。用0.1mol/LNaOH或HCl將培養(yǎng)基的pH調(diào)至所需的數(shù)值，然后分裝到培養(yǎng)容器中。根據(jù)材料的不同，裝入培養(yǎng)基的量稍有差別，一般培養(yǎng)裝入0.7~1.2cm厚，讓培養(yǎng)材料能保持原有的狀態(tài)即可。最后包扎好瓶口或蓋上瓶蓋，對(duì)不同配方的培養(yǎng)基要做好標(biāo)記，以免混淆。

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培養(yǎng)基的pH是影響植物組織培養(yǎng)成功的因素之一。不同種類的植物，其生長(zhǎng)發(fā)育適宜的pH值也不同，應(yīng)該根據(jù)所培養(yǎng)的植物特性來確定pH值，多數(shù)植物要求滅菌前培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)到5.7~5.8。經(jīng)高溫高壓滅菌后，培養(yǎng)基的pH值會(huì)下降0.2~0.8個(gè)的安慰，故滅菌前的pH要高于目標(biāo)pH值0.5個(gè)單位。

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