桉樹組培技術(shù) |
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來源: 作者: 發(fā)布時間:2013-07-23 17:14 |
組織培養(yǎng)指以分離出植物各部分的組織,如分生組織、形成層、木質(zhì)部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、髓部等或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無菌培養(yǎng)。桉樹組織培養(yǎng)研究始于60年代,據(jù)報道,有20多種桉樹可通過植株的不同部分,種子、下胚軸、幼苗的根、莖段、葉柄、葉片、莖尖、結(jié)節(jié)、花藥、樹皮外植體和花粉粒等。通過組織培養(yǎng)形成愈傷組織,目前,桉樹組織培養(yǎng)發(fā)展很快,已解決了連續(xù)培養(yǎng)小植株的器官發(fā)生,試管苗的移栽和移栽后生長等一系列關(guān)鍵技術(shù)問題。 苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com 2外植體消毒 將采回的桉樹嫩莖段剪去葉片,用自來水洗干凈,在無菌條件下用70%酒精浸泡10秒鐘,再用新潔爾滅溶液或0.1升汞溶液浸5~6分鐘消毒,用無菌水沖洗4~5次,然后切取含1~2個腋芽的莖段接種在培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)培養(yǎng),試驗證明,重復(fù)消毒一次效果更佳。 3褐變及其預(yù)防 桉樹莖段接種后,如切口處產(chǎn)生褐色滲出物,使莖段周圍的培養(yǎng)基變成棕褐色,莖段在培養(yǎng)基內(nèi)的基部變褐色就會失去生命力,導(dǎo)致外植體死亡、嚴(yán)重地影響了外植體誘導(dǎo)的成功率,可采取以下措施綜合防治。盡量避免組織傷害,用于切割的解剖刀應(yīng)盡可能鋒利,切割外植體時,把組織浸于水中隔絕空氣、切面要垂直、切口的損傷要減至最低的限度,接種時選擇表面消毒過程中沒有損傷的莖段,注意不讓腋芽附著培養(yǎng)基,利用漫射光培養(yǎng),由于光能提高多氧化酶的活性,從而促進多酚化合物的氧化,因此在弱光下培養(yǎng),能有效地降低多酚氧化物的氧化。及時轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基,當(dāng)發(fā)生褐變時應(yīng)及時轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基,使褐化不影響腋芽周 圍的組織,外植體仍有萌動的生命力。 4芽的誘導(dǎo) 將含有腋芽的莖段接種在1/2MS+0.5mg/LBA+1mg/LIBA的培養(yǎng)基上,在26下進行誘導(dǎo)培養(yǎng),經(jīng)20~30天培養(yǎng),可形成肉眼可見的愈傷組織,誘導(dǎo)率達95%以上,愈傷組織多發(fā)生在切口處、呈顆粒狀、緊密、也可發(fā)生在非切口處、呈瘤狀、疏松。 999中國苗木網(wǎng),999miaomu.com 5芽的增殖 將愈傷組織轉(zhuǎn)移到MS+0.5mg/LBA+0.25mg/LIBA的培養(yǎng)基上,在此條件下兩種愈傷組織都可形成芽,但瘤狀愈傷組織多產(chǎn)生叢生型芽,不能抽莖和展葉顆粒狀愈傷組織形成單生型芽、芽多而密集、能抽莖和展葉。 6生根苗的誘導(dǎo) 當(dāng)苗高2~3cm時,即可進行生根的誘導(dǎo),一般一個500ml的三角瓶有400~600 個芽條,能夠做生根的有效芽為30~60條,切取健壯的芽條轉(zhuǎn)移到White+0.2~1mg/LIBA+40mg/L,腺嘌呤+2%蔗糖或White+0.5mg/LIBA+4%蔗糖的生根培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),在室內(nèi)散射光照條件,光照強度為2000~3000lx下,1~2周即開始發(fā)根,然后利用較強的自然散射光照光照強度為3000~5000lx進行培養(yǎng)10天左右,即可在苗的基部產(chǎn)生根而形成完整植株,一般發(fā)根率可達80%以上。 2胚狀體的誘導(dǎo)和生長 第一取無菌種子或無菌發(fā)芽后的苗段接種在B5H或改良H成分為NH4NO348.8mg/LKNO341.6mg/L其余的與B5的成分相同,加0.8~1.0mg/LKIN+2mg/L~4mg/L2.4-D+4%~5%蔗糖的固體培養(yǎng)基上,放在28氣溫環(huán)境和12小時光照下培養(yǎng)3~4天可產(chǎn)生愈傷組織,經(jīng)20余天迅速增殖成紅里帶白色的愈傷組織。 第二把上述愈傷組織及時移到H或改良H+0.2~1.0mg/LBA+0.5mg/LNAA+3%~5%蔗糖的固體培養(yǎng)基上,在光和28下培養(yǎng),這時愈傷組織增殖速度減慢培養(yǎng)1~2周,逐漸呈粉紅色、表面光滑、結(jié)構(gòu)致密、生機勃勃、再經(jīng)3~6周培養(yǎng)愈傷組織表面更光滑,呈紫紅色顆粒狀,它就是胚性細(xì)胞團,從中可分化出許多胚狀體。 999中國苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com 第三把這些細(xì)胞團接種在H或改良H+0.2mg/LBA+0.5mg/LNAA+3%~5%蔗糖的培養(yǎng)基上,培養(yǎng)約10~30天可長出大量綠苗、但發(fā)根少、因此把它移入H或改良H+0.5mg/L~1.0mg/LIBA+3%蔗糖的固體培養(yǎng)基上在28和光下培養(yǎng)6~8天,便會長成根系發(fā)達的完整苗木。 第四桉樹胚性細(xì)胞團可以較長期繼代培養(yǎng)而不喪失分化能力但愈傷組織繼代三次就會喪失分化能力繼代用的培養(yǎng)基仍為前述的分化培養(yǎng)基繼代時的胚性細(xì)胞團的大小,以0.1~0.2cm3為宜繼代周期為15~30天以20天左右最佳。 3組培幼苗的移植 桉樹組培苗經(jīng)過誘導(dǎo)生根成苗其木質(zhì)化程度還非常低瓶苗從無菌,光照、溫度恒定、濕度飽和的人工控制培養(yǎng)條件下轉(zhuǎn)入有菌、光、溫、濕不易控制的外界環(huán)境時,這個過程使幼苗自身葉片的光合能力和根的主動吸收能力逐漸增強,葉片表面的保護層也逐漸形成,這時幼苗才算完成了從異養(yǎng)到自養(yǎng)的轉(zhuǎn)變過程,因此,組培幼苗的移植必須按一定程序逐步進行。瓶苗發(fā)根率達80%以上時可移到室外在自然光下再培養(yǎng)6~10天,當(dāng)小苗充分木質(zhì)化,葉片舒展、葉色濃綠、莖軸、根系伸長時即可移栽出瓶外,育苗容器與 基質(zhì)配比與扦插苗培育相同,移栽前用0.15%~0.3%的高錳酸鉀溶液進行基質(zhì)消毒,倒出培養(yǎng)基,小心洗去殘留在根上的培養(yǎng)基,并截去過長的根,保留2cm左右用0.1%的殺菌劑進行小苗消毒處理,根部再經(jīng)IBA生根激素溶液處理后移入育苗基質(zhì)中,置于育苗架上在70%遮光度的蔭棚內(nèi)培育25~30天移植初期要覆蓋塑料薄膜保溫保濕,等小苗高3cm生長穩(wěn)定后即可進行露天煉苗當(dāng)小苗長至15~20cm時可以出圃造林或用作扦插母株。 中國苗木網(wǎng),www.cqhuayin.com 同時在移栽過程中幼苗抗逆性差極易感霉菌死亡因此在高溫高濕的溫室或覆蓋塑料薄膜的苗床上培育移植苗時,要注意溫室或苗床的通透性,每周用0.1%的多菌靈等殺菌劑噴一次消毒滅菌。 苗木網(wǎng),999miaomu.com |
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