快速繁殖培養基的配制 |
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來源: 作者: 發布時間:2013-07-21 11:29 |
1、配制母渡:為了減少各種物質的稱量次數,一般接培養基配方中規定的各種化合物的重量擴大1 0倍、I100倍或1000倍稱量溶解,成為濃縮液,稱為母液?膳渲茷楦鞣N母液,如大量元素母液、微量元素母液。也可配制單種維生素、植物生長素的母液。配制大量元素母液,應注意按配方中的排列順序,對每種化合物以其10倍(或1 00、1 000倍)用量單獨稱出,分別溶解,再按先后順序混合在一起,避免發生反應沉淀。最后加蒸餾水定容到1升。配制微量元素母液為達到稱量精確·以每種化合物的100倍或1000倍量分別稱取溶解,再混臺在一起。注意鐵鹽要單獨配制;維生素,植物生長素、細胞分裂素及氨基酸等都要單個分別稱量溶解,定容后備用。各種母液為避免變質,均應保存于冰箱中。對較難溶于水的物質,如植物生長素類,可用少量0.1N氫氧化鈉溶解,或用95%酒精溶解,再加蒸餾水稀釋定容。細胞分裂書宜先用少量0.5N或1N鹽酸溶解,加蒸餾水定容。葉酸宜先用少量的稀氨水溶解后加水定容。 999苗木網,999miaomu.com 2、配制培養基:根據培養基配方中各種物質的具體需要量,用量筒或移棱管從各種母液中逐項按昔吸取。培養基中各種物質的計量單位,我國多用毫克/升。國內外有些文獻也有用mol/L為單位。即每升溶液中所含該成分的質量。就是將各種成分的摩爾質量(g/Mol/l乘以每升溶液中該成分的物質的量濃度(mol/L)。如該成分的濃度的單位為mmolL或Umo/L,則每升中所含該成分的質量分別為毫克或徽克。(你知道文竹的養殖方法嗎?)母液的吸取量按下式計量: 苗木網,www.cqhuayin.com
母液吸取量(毫升)一每升培養基要求含量/每毫升母液含量 中國苗木網,999miaomu.com 先按量稱瓊脂,加水后加熱,不斷攪拌使溶解,然后加入吸取的各種物質的母液及蔗糖,使茸均勻混合·最后用蒸餾水定容。隨即用pH計或pH試紙測定pH值,用0.IN NaOH或IN HO作緩沖劑將培養基的pH調至5.6-5.8。不同植物的外植體對pH值的要求不同。加I%PB74作緩沖劑,對預防培養基pH的波動有良好效果。通常培養基的pH值,在滅菌前后,接種外植體后,均會產生一定變化。用分裝器或漏斗將配好的培養基分裝入供培養用的事先已洗凈烤干的玻璃容器(三角瓶或試管)內。裝量為容器的1/4-1/5,塞上棉花塞,或用鋁鉑紙或移量紙包扎瓶口,用玻璃鉛筆標上記號。 999苗木網,www.cqhuayin.com 3、培養基的滅菌:固體培養基常用高壓滅菌法。將包扎好的培養基,放入高壓消毒鍋中,在鍋內溫度高達120C,壓力穩定在0 8--1.1公斤/厘米:,滅菌15-25分鐘.滅菌時間過長,培養基中某些成分易失效。經過滅菌的培養基放在4-5C的無菌接種室內待用,存放時間不宜太長,一般要在兩周內用完。(三)培養基配方 中國苗木網,999miaomu.com 1934年美國科學家懷特(White)首先研究出組織培養的培養基。以后斯可格(Skoog)、 苗木網,www.cqhuayin.com
米勒(Miller),斯蒂瓦特(Sieward)等都提出不同的培養基配方。不同培養基有其不同的特點,應通過分析和進一步試驗研究,為不同檀物的不同器官,不同培養階段找出最佳配方。 999中國苗木網,999miaomu.com 目前在木本植物離體培養中,應用較廣的培養基主要有: 999苗木網,999miaomu.com
I、MS培養基:在術本植物組培中應用最為廣泛。其特點是無機鹽(硝酸鹽、鉀鹽和銨鹽)含量較高;微量元素種類較多,濃度也較高。適合許多樹種對營養的需要,故分化快,生長好。近幾年我們選擇Ms培養基用于10余種針闊葉樹的離體培養均獲得成功。 999苗木網,www.cqhuayin.com 2、BL培養基(1965):其成分基本同MS培養基。唯去掉甘氯酸,鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆素,增加天冬酰胺。 999苗木網,www.cqhuayin.com 3、ER培養基(1965):與MS基本相似。但磷酸鹽含量比Ms高一倍、微量元素卻低得多。 999中國苗木網,www.cqhuayin.com 4、H培養基(1967):大量元素無機鹽約為MS的一半、磷酸二氫鉀及氯化鈣稍低;徽量元索含量較MS高但種類少,維生素種類較多。 999苗木網,www.cqhuayin.com 5、培養基(1968):硝酸鉀含量較高,不含銨態氮,鹽酸硫胺紊含量甚高。鹽酸毗哆素含量也較高。 苗木網,www.cqhuayin.com 6、Ns培養基(1975):硝酸鹽含量高,不含銨態氮,鹽酸硫胺素含量較高。 中國苗木網,999miaomu.com 7 、SH培養基(1972);硝酸鉀含量較高,銨與磷酸足以NH4H2PO4提供的。 999苗木網,999miaomu.com
8、WH培養基(L943):和改良WH培養基(1981)只含硝態氮,無機鹽含量低。 苗木網,999miaomu.com 9 、WS培養基(1966):無機鹽含量低,微量元素種類少。適用于某些樹種的生根培養。 999苗木網,www.cqhuayin.com 10、 HE培養基(1953):鉀鹽和硝酸鹽是通過不同化合物來提供。無機鹽含量稍低, 中國苗木網,www.cqhuayin.com
11、ls培養基(1965):與MS培養基類似。大量、微量元素及鐵鹽同MS.有機物質中去掉甘氨酸、煙酸和鹽酸毗哆素。 苗木網,999miaomu.com
可見,各種培養基的成分,總鹽分濃度,各種鹽類的濃度及各元素間的比例都有很大差異。它們對外植體的形態發生及生長速率都有根大影響。一般在芽的形成和增殖階段需要選用較高的總鹽類濃度的培養基。而誘導生根則需較低的總鹽濃度。不同樹種芽形成所需的最佳無機鹽總濃度可相差1-3倍。 999苗木網,www.cqhuayin.com
上述11種培養基,常在木本植物離體培養中采用,獲得良好的效果。這些培養基中各種無機鹽及有機成分含量詳見表9-1。 999苗木網,www.cqhuayin.com
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