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三葉青的組織培養(yǎng)與快速繁殖研究

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來源: 作者: 發(fā)布時間:2013-07-21 11:29

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  三葉青又名有角烏蘞莓、石老鼠,為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤。主要分布于長江以南地區(qū),但多年來三葉青被毀滅性挖取,種源稀少。筆者應(yīng)用組織培養(yǎng)進行快速繁殖研究,以期解決資源緊缺問題。?
  1材料?
  1.1藥材:試驗材料采自安徽省,外植體取莖尖、帶腋芽的莖段和葉片。?
  1.2培養(yǎng)基:基本培養(yǎng)基為M S按不同處理方案添加不同類型的植物激素,用0.1N NaOH和0.1N HCL調(diào)節(jié)pH值為5.8~6.0,在高壓滅菌鍋中高溫(121℃)滅菌20min。上述培養(yǎng)基均加3%蔗糖、1%瓊脂,培養(yǎng)室溫度25℃左右,每天光照13h,光照強度2000 1x左右。移栽基質(zhì)經(jīng)過滅菌消毒處理,按m(珍珠巖):m(草炭):m(菜園土)=1∶1∶1比例混合。?
  2試驗方法與結(jié)果?
  2.1樣品處理:取莖尖、莖段(帶芽)和葉為外植體,按下列程序進行消毒:
  取材→自來水粗洗→5%洗衣粉水溶液漂洗5min→自來水沖洗30min→75%乙醇擦洗表面→0.1%升汞溶液中消毒5min→2%次氯酸鈉溶液中消毒20min→無菌水沖洗4~6次,然后在無菌工作臺中將外植體切成0.5~1.0cm長的小段。
  2.2誘芽培養(yǎng):分別將不同部位的外植體接種到表1各培養(yǎng)基中,觀察出芽情況,計算誘芽率。?
  不同植體對愈傷組織誘導(dǎo)不一樣,在由3號培養(yǎng)基的激素濃度配比下試驗結(jié)果(見表2)。?

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  2.3繼代增殖:將誘導(dǎo)出來的愈傷組織及芽叢轉(zhuǎn)到新的3種不同激素組合的培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)。將初代培養(yǎng)的芽叢分離并切割成2cm的莖段,接種于培養(yǎng)基MS+NAA 0.2;MS+6?BA 0.02+NAA 0.5;MS+6?BA 2+NAA 0.2。接種后給予全天光照,室溫20~28℃。1周后腋芽萌動且萌蘗生長很快。?
  2.4生根培養(yǎng):不同激素組合對其生根狀況影響較大(表4)。將誘導(dǎo)成活的叢生芽切割成單芽,分別轉(zhuǎn)接到表3各培養(yǎng)基中(每瓶接1個芽),30 d后4號培養(yǎng)基的生根率最高達74%。?
  2.5移栽定植:芽長到3~4cm時,切取健壯的植株轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上,所有的植株都能正常生長,培養(yǎng)1周后,即誘導(dǎo)出根,10d后每株可長出3~5條根,根長達4~5cm。再培養(yǎng)1周,植株健壯,葉色濃綠,然后揭去紙蓋練苗。輕輕洗去根部培養(yǎng)基,移到蛭石的小盆中,蓋上塑料膜及燒杯,保持較高的溫度,10d后揭去塑料膜及燒杯,可移栽到大田,小苗成活率95%。?
  3小結(jié)
  對三葉青不同部位的外植體進行誘導(dǎo),在相同消毒處理下和同種培養(yǎng)基中,最佳誘導(dǎo)外植體為莖尖。初代培養(yǎng)過程中以3號培養(yǎng)基為最佳,生根培養(yǎng)基以4號為最佳。6?BA在三葉青的繼代培養(yǎng)中的作用可以忽略不計,可以認為MS+NAA 0.2是最佳組合的繼代增殖培養(yǎng)基。
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